核酸檢測(cè)情況精選(九篇)
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第1篇：核酸檢測(cè)情況范文
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.03.619
【中圖分類號(hào)】R3 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1671-8801（2014）03-0399-01
獻(xiàn)血者血液必須經(jīng)過(guò)經(jīng)血傳播疾病病毒檢測(cè)合格，才能發(fā)往臨床，保證用血者的安全。傳統(tǒng)血液篩查采用酶聯(lián)免疫法對(duì)獻(xiàn)血者血液進(jìn)行檢測(cè)，雖然酶聯(lián)免疫技術(shù)應(yīng)用已經(jīng)很成熟，但仍存在方法本身的限制，病毒感染“窗口期”較長(zhǎng)。我站從2010年12月開(kāi)始對(duì)常規(guī)酶免檢測(cè)合格的獻(xiàn)血者血液，增加艾滋病毒核酸（HIV DNA）檢測(cè)，檢出1例艾滋感染“窗口期”的獻(xiàn)血者，阻止了該獻(xiàn)血者血液進(jìn)入臨床，感染患者，保證了輸血安全?，F(xiàn)對(duì)該血液的檢測(cè)情況總結(jié)如下。
1 材料與方法
1.1 標(biāo)本來(lái)源。本站無(wú)償獻(xiàn)血者，男，20歲，追蹤采集獻(xiàn)血者標(biāo)本3次。
1.2 試劑與方法。①ELISA檢測(cè)。對(duì)獻(xiàn)血者血液標(biāo)本采用3種酶免試劑（北京萬(wàn)泰試劑、法國(guó)伯樂(lè)試劑，均為4代試劑，可檢測(cè)P24抗原；珠海麗珠抗體檢測(cè)試劑）平行檢測(cè)抗-HIV1/2，操作中嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書和本站操作規(guī)程進(jìn)行操作。②核酸檢測(cè)。首次獻(xiàn)血標(biāo)本經(jīng)酶免檢測(cè)合格，采用上海浩源核酸血液篩查試劑進(jìn)行核酸檢測(cè)，核酸篩查陽(yáng)性標(biāo)本采用羅氏核酸定量試劑進(jìn)行定量檢測(cè)。③蛋白印記確證檢測(cè)。對(duì)核酸陽(yáng)性標(biāo)本再進(jìn)行蛋白印記確證實(shí)驗(yàn)。
2 結(jié)果
2.1 追蹤采集標(biāo)本時(shí)間及酶免和核酸檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。
3 討論
本例HIV RNA陽(yáng)性標(biāo)本，經(jīng)過(guò)對(duì)該獻(xiàn)血者的追蹤檢測(cè)，證明該獻(xiàn)血者獻(xiàn)血時(shí)正處于“窗口期”感染。血清學(xué)酶免檢測(cè)在第1次追蹤檢測(cè)時(shí)，進(jìn)口伯樂(lè)試劑開(kāi)始轉(zhuǎn)陽(yáng)，而國(guó)產(chǎn)萬(wàn)泰試劑和麗珠試劑仍為陰性，說(shuō)明在獻(xiàn)血后第4天，血液中P24抗原已經(jīng)轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，且進(jìn)口試劑靈敏度高于國(guó)產(chǎn)試劑。第2次和第3次追蹤檢測(cè)時(shí)，所有的血清學(xué)指標(biāo)和蛋白印記確證試驗(yàn)都轉(zhuǎn)為陽(yáng)性，明確該獻(xiàn)血者被感染艾滋病毒，獻(xiàn)血時(shí)正處于感染窗口期。有文獻(xiàn)報(bào)道，核酸檢測(cè)技術(shù)可將HIV感染的“窗口期”縮短11天（縮短“窗口期”的50%）[1]。在本研究中，核酸檢測(cè)將病毒檢測(cè)的“窗口期”提前了4天。核酸檢測(cè)技術(shù)在我國(guó)還處于起步階段，在血液篩查中的必然性和重要性逐步顯現(xiàn)。隨著該技術(shù)在全國(guó)各采供血機(jī)構(gòu)中陸續(xù)開(kāi)展，不斷提高血液檢測(cè)質(zhì)量，縮短病毒檢測(cè)“窗口期”，為社會(huì)提供安全、有效的血液，挽救患者生命。
第2篇：核酸檢測(cè)情況范文
關(guān)鍵詞：乙肝病毒；前S1抗原；脫氧核糖核酸；乙肝病毒e抗原
根據(jù)調(diào)查研究我國(guó)是乙型肝炎高發(fā)區(qū)，前S1抗原是乙型肝炎病毒的重要組成部分，在肝細(xì)胞受乙型肝炎病毒感染中起著重要的作用。隨著我國(guó)近幾年對(duì)乙型肝炎、前S1抗原的研究發(fā)現(xiàn)前S1抗原在乙型肝炎診療中具有一定的應(yīng)用價(jià)值，本文對(duì)前S1抗原、脫氧核糖核酸、乙肝病毒e抗原的檢測(cè)進(jìn)行研究，分析前S1抗原檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用價(jià)值。
1 資料與方法
1.1一般資料 選取100例乙型肝炎患者，其中男性65例，女性35例，年齡在12～75歲，平均年齡為41.5歲，所有研究對(duì)象的表面抗原檢測(cè)均呈現(xiàn)陽(yáng)性，符合肝炎病毒診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除了其他類型的肝炎。
1.2方法 前S1抗原、乙肝病毒e抗原的檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法，脫氧核糖核酸檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本次研究中的所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P
2 結(jié)果
所有乙肝病毒患者血清樣本中前S1抗原呈現(xiàn)陽(yáng)性的有76例，乙肝病毒e抗原呈現(xiàn)陽(yáng)性的有61例，脫氧核糖核酸呈現(xiàn)陽(yáng)性的有83例。其中乙肝病毒e抗原陽(yáng)性61例患者中前S1抗原呈現(xiàn)陽(yáng)性的有47例，陽(yáng)性率為77.05%，脫氧核糖核酸呈現(xiàn)陽(yáng)性的有50例，陽(yáng)性率為81.97%，前S1抗原陽(yáng)性率和脫氧核糖核酸陽(yáng)性率比較，差異不明顯，P>0.05，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在脫氧核糖核酸呈現(xiàn)陽(yáng)性的83例中，前S1抗原陽(yáng)性72例，陽(yáng)性率為86.75%，乙肝病毒e抗原呈現(xiàn)陽(yáng)性的有48，陽(yáng)性率為57.83%，前S1抗原陽(yáng)性率和脫氧核糖核酸陽(yáng)性率比較，有顯著差異P
3 討論
乙肝病毒的傳統(tǒng)途徑有血液、母乳喂養(yǎng)等，我國(guó)當(dāng)前乙型肝炎的發(fā)病率非常的高，乙肝病毒成為危害我國(guó)人民健康的最為嚴(yán)重的一種病毒性肝炎。近幾年我國(guó)醫(yī)學(xué)界對(duì)乙型肝炎的研究取得較大的成就，對(duì)乙型肝炎病毒的研究主要是通過(guò)對(duì)乙型肝炎病毒患者的血清標(biāo)志物、脫氧核糖核酸、乙肝病毒e抗原等進(jìn)行檢測(cè)，在通過(guò)患者的臨床表現(xiàn)進(jìn)行診斷[1]。以前采用的血清標(biāo)志物檢測(cè)無(wú)法將乙型肝炎病毒在患者體內(nèi)的恢復(fù)情況進(jìn)行反映，只能將乙型肝炎病毒在患者體內(nèi)的免疫狀態(tài)進(jìn)行反映，無(wú)法將檢測(cè)結(jié)果作為患者的乙型肝炎診斷依據(jù)，而脫氧核糖核酸含量的檢測(cè)結(jié)果能作為乙型肝炎病毒傳染性的直接診斷依據(jù)，當(dāng)前對(duì)乙型肝炎的研究得出前S1抗原和脫氧核糖核酸有密切的關(guān)系。在人體感染乙型肝炎病毒以后，首先受到影響的就是前S1抗原，所以對(duì)前S1抗原進(jìn)行檢測(cè)，可以將人體的免疫狀況進(jìn)行反映。
本次研究中100例乙肝患者的血清檢測(cè)，前S1抗原呈現(xiàn)陽(yáng)性的有76例，乙肝病毒e抗原呈現(xiàn)陽(yáng)性的有61例，脫氧核糖核酸呈現(xiàn)陽(yáng)性的有83例。在61例乙肝病毒e抗原陽(yáng)性患者中前S1抗原和脫氧核糖核酸的檢出率分別為77.05%，81.97%，而在83例脫氧核糖核酸陽(yáng)性患者中乙肝病毒e抗原、前S1抗原檢出率為57.83%，86.75%。前者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，后者P
由此我們可以得出前S1抗原在乙肝病毒傳染中起到一定的提示作用，和脫氧核糖核酸有相關(guān)性，而且這種相關(guān)性要高于和乙肝病毒e抗原之間的相關(guān)性，可以將乙肝病毒傳染強(qiáng)度進(jìn)行反映。乙肝病毒前S1抗原可以作為乙肝病毒感染的臨床檢測(cè)指標(biāo)，在臨床乙肝病毒診療中具有非常重要的應(yīng)用價(jià)值，可以將乙肝病毒前S1抗原檢測(cè)技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中廣泛使用[2]。
參考文獻(xiàn)：
第3篇：核酸檢測(cè)情況范文
現(xiàn)在去武漢需要做核酸檢測(cè)嗎12月 現(xiàn)在去武漢是不需要做核酸檢測(cè)的，但前提是你是低風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)，畢竟按照抗疫規(guī)定全國(guó)低風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)武漢憑健康碼綠碼、體溫正常即可通行，但是如果你是高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)的，全國(guó)中高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)來(lái)武漢地區(qū)，請(qǐng)主動(dòng)到當(dāng)?shù)厣鐓^(qū)進(jìn)行申報(bào)并配合當(dāng)?shù)匾咔榉揽刂笓]部的所有防控措施到指定地點(diǎn)隔離14天。隔離期間，將進(jìn)行2次核酸檢測(cè)以及1次抗體檢測(cè)。
12月去武漢會(huì)被隔離嗎 12月去武漢不會(huì)被隔離，不過(guò)是低風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)。
假使你是從中高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)到達(dá)武漢，用不用核酸檢測(cè)、隔離，就要視武漢的防控措施來(lái)定，通常情況下，應(yīng)該給到7天核酸陰性證明就能通過(guò)，亦可能必須進(jìn)行核酸檢測(cè)并隔離14天。假使你是從低風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域去武漢，基本可以直接進(jìn)入，不用進(jìn)行核酸檢測(cè)和隔離。
12月去武漢要注意什么 1、任何時(shí)候來(lái)武漢旅游記得帶上雨具。當(dāng)然，秋季雨水要少一點(diǎn)。
2、不要低估武漢的冷，即使東北來(lái)的也不要充大爺，武漢的冷可以整得你鼻青臉腫。
3、和其它城市一樣，盡量避開(kāi)火車站的拉客，但你若感覺(jué)信心滿滿，試試也無(wú)妨。
第4篇：核酸檢測(cè)情況范文
2022五一學(xué)生出省回來(lái)要隔離嗎
如果學(xué)生去的是低風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)，健康碼是綠碼，核酸是陰性，體溫正常，一般不需要隔離。
從中等和高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)返回時(shí)需要隔離，從省外低風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)返回時(shí)不需要隔離，但需要進(jìn)行核酸檢測(cè)。
對(duì)于從中高危地區(qū)返回的學(xué)生，需要進(jìn)行14天的集中隔離。隔離期間，嚴(yán)格遵守觀察點(diǎn)規(guī)定，配合核酸檢測(cè)和健康監(jiān)護(hù)。
在家庭健康監(jiān)測(cè)期間，除非必要，否則不要外出，也不要參加任何聚會(huì)活動(dòng)。對(duì)造成疫情傳播或者傳播風(fēng)險(xiǎn)的，依法追究責(zé)任。
2022五一學(xué)生出省需要做核酸嗎
一般都需要核酸檢測(cè)。
很多地方都有一些要求。例如，對(duì)于來(lái)自中高危地區(qū)的學(xué)生，教師應(yīng)進(jìn)行核酸檢測(cè)和醫(yī)學(xué)觀察。對(duì)于來(lái)自低風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)的學(xué)生來(lái)說(shuō)，核酸檢測(cè)可能不是必需的。這還需要各地和學(xué)校根據(jù)當(dāng)?shù)匾咔榉揽匾筮M(jìn)行安排。
如果學(xué)校有特殊情況，比如突然發(fā)燒或其他身體異常，其他學(xué)生也可以戴口罩。如果出現(xiàn)突發(fā)疫情，應(yīng)緊急啟動(dòng)應(yīng)急預(yù)案，并可能要求相關(guān)人員采取相應(yīng)的防控措施。首先要做的是戴口罩。
五一期間怎么做好防護(hù)
1.外出時(shí)，攜帶足夠的口罩、快干手消毒劑等個(gè)人防護(hù)用品，科學(xué)佩戴口罩，做好手衛(wèi)生。
2.盡量減少與公共交通工具上其他人的溝通，避免聚集，并盡可能與其他乘客保持距離。盡量避免直接接觸門把手、電梯按鈕等公共設(shè)施。接觸后及時(shí)洗手或用快干手消毒劑擦拭干凈。
第5篇：核酸檢測(cè)情況范文
“電話發(fā)我！”短短四個(gè)字，讓“深圳衛(wèi)健委”的詞條迅速?zèng)_上了微博熱搜第一。
事件起源于1月8日，深圳一位市民Prnliy在“深圳衛(wèi)健委”微信公眾號(hào)上留言求助：“昨晚9點(diǎn)在龍華中心醫(yī)院做的核酸，產(chǎn)婦等著住院要核酸證明才能入住，什么時(shí)候能出結(jié)果??？12小時(shí)了。能不能優(yōu)先安排，因?yàn)檎娴耐??！辈坏揭环昼妰?nèi)，深圳市衛(wèi)健委火速在留言區(qū)回復(fù)稱：“電話發(fā)我。”
緊接著，經(jīng)過(guò)深圳市衛(wèi)健委、深圳市龍華區(qū)中心醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)爭(zhēng)分奪秒地協(xié)調(diào)和安排，一個(gè)半小時(shí)后，該市民收到了后方上傳的核酸檢測(cè)報(bào)告，而后孕婦也順利辦理了住院。
網(wǎng)友紛紛點(diǎn)贊，并表示 “感動(dòng)”“好感拉滿”“好酷，深圳速度”。有網(wǎng)友稱，這是 “2022年目前看到的最霸氣的四個(gè)字”。
昨天下午，深圳市衛(wèi)健委宣教處處長(zhǎng)王嶺向記者表示：“我們只是做了應(yīng)該做的?！?/p>
【事件】
不能入院!
孕婦核酸檢測(cè)未出結(jié)果
王嶺介紹，她作為深圳衛(wèi)健委公眾號(hào)的負(fù)責(zé)人，會(huì)時(shí)常關(guān)注后臺(tái)的留言信息，對(duì)于存在緊急情況的留言及時(shí)給予回復(fù)，并安排處理。
1月8日上午10點(diǎn)57分，她在后臺(tái)收到一位市民求助稱：“昨晚（1月7日）9點(diǎn)在龍華中心醫(yī)院做的核酸，產(chǎn)婦等著住院要核酸證明才能入住，什么時(shí)候能出結(jié)果?。?2小時(shí)了?！痹谠摿粞韵路剑貜?fù)了一句：“電話發(fā)我?！?/p>
王嶺表示，要到留言的何先生電話以后，她把何先生反映的問(wèn)題轉(zhuǎn)交龍華中心醫(yī)院進(jìn)行處理。醫(yī)院相關(guān)負(fù)責(zé)人告訴王嶺：“昨晚的標(biāo)本結(jié)果已出來(lái)，正在做上傳處理，但數(shù)據(jù)量大，還是有延遲?！?/p>
1月8日11點(diǎn)17分，醫(yī)院門診部聯(lián)系何先生詢問(wèn)采樣過(guò)程，并請(qǐng)他提供夫妻二人姓名與身份證號(hào)碼。醫(yī)院查詢后發(fā)現(xiàn)，何先生提供的信息在醫(yī)院未查詢到結(jié)果。何先生稱，采樣地點(diǎn)是在“大門進(jìn)來(lái)左邊往中醫(yī)科那條路”。
醫(yī)院發(fā)現(xiàn)，何先生所說(shuō)的是一個(gè)醫(yī)院設(shè)置的臨時(shí)采樣點(diǎn)，采樣后標(biāo)本被送到第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)。而醫(yī)院為入院患者專門設(shè)置了采樣點(diǎn)，都是由醫(yī)院自己實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的。于是王嶺又問(wèn)詢第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，得到回復(fù)稱：“結(jié)果已出，但因人手不足未經(jīng)審核，馬上審核?！?/p>
當(dāng)天12點(diǎn)28分，何先生及愛(ài)人的核酸檢測(cè)報(bào)告被上傳到系統(tǒng)。王嶺立即將消息發(fā)給何先生，并收到何先生的回復(fù)短信：“好的，已收到。感謝。”
【結(jié)果】
“電話發(fā)我”!
霸氣回復(fù)顯速度更顯溫度
截至1月9日10時(shí)許，深圳市衛(wèi)健委這則簡(jiǎn)短回復(fù)已收獲2萬(wàn)多次點(diǎn)贊，話題閱讀量已高達(dá)2.8億。
對(duì)此，有網(wǎng)友表示：“電話發(fā)我”彰顯霸總氣場(chǎng)，并廣為流傳?！半娫挵l(fā)我，2022年目前看到最霸氣的四個(gè)字”……
昨天下午，何先生向記者證實(shí)了此事，新華社也對(duì)他進(jìn)行了采訪。
何先生表示，夫妻倆來(lái)深圳4年多，這是他們的第一個(gè)寶寶。留言求助之后，很快就接到了來(lái)自龍華中心醫(yī)院的電話并查到了核酸結(jié)果，粵康碼也出來(lái)了，他的太太順利入住了醫(yī)院。目前孕婦的情況穩(wěn)定，正在深圳市中醫(yī)院進(jìn)一步治療。
“感謝深圳市衛(wèi)健委及時(shí)幫忙聯(lián)系了做核酸的醫(yī)院錄入了結(jié)果，（我們）順利辦理了入院?！?月8日，何先生在微博上留言透露，他愛(ài)人懷孕8周左右，應(yīng)該是孕婦，不是產(chǎn)婦，但情況還不穩(wěn)定，醫(yī)院建議住院觀察治療，當(dāng)時(shí)他在“深圳衛(wèi)健委”微信公眾號(hào)留言是想加快核酸錄入?！跋Ｍ麑殞殘?jiān)強(qiáng)健康留下來(lái)，以后也去‘深圳衛(wèi)健委’當(dāng)小編。”
王嶺稱，目前深圳市正在進(jìn)行大規(guī)模核酸檢測(cè)，無(wú)論是單方個(gè)人采集還是集體采集，報(bào)告結(jié)果出來(lái)的時(shí)間可能會(huì)較平時(shí)稍有延遲，“我們作為官方公號(hào)后臺(tái)與市民有直接聯(lián)系的渠道，如果遇到緊急情況，當(dāng)然也要緊急處理，回復(fù)也好，協(xié)調(diào)也好，我們也只是按照國(guó)家要求做了應(yīng)該做的?！?/p>
【專訪】
應(yīng)該做的!
服務(wù)型政府就是服務(wù)民眾
對(duì)于深圳市衛(wèi)健委的這一處理方式，網(wǎng)友們紛紛點(diǎn)贊。
“深圳市政府是服務(wù)型政府，簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)就是服務(wù)民眾。當(dāng)時(shí)我們沒(méi)有想那么多，只想著盡快幫助市民解決問(wèn)題就好。”1月9日，深圳市衛(wèi)健委宣教處處長(zhǎng)王嶺接受采訪時(shí)表示。
王嶺介紹，根據(jù)國(guó)務(wù)院副總理的講話，深圳市召開(kāi)了疫情防控新聞會(huì)，提出了統(tǒng)籌做好疫情防控和就醫(yī)服務(wù)保障工作，督促各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)不能以任何借口推諉拒收患者，對(duì)透析患者、放化療等腫瘤患者以及孕產(chǎn)婦、新生兒等急需就醫(yī)的，建立24小時(shí)值班值守制度，確保就診救治需求得到充分保障。
在接受記者采訪時(shí)，王嶺回顧了此事的經(jīng)過(guò)，“深圳衛(wèi)健委”微信公眾號(hào)有1400萬(wàn)粉絲，平時(shí)收到很多網(wǎng)友留言求助，8日上午，她看到這一單求助比較緊急，就馬上回復(fù)網(wǎng)友：“電話發(fā)我?！蹦玫诫娫捯院螅苯影l(fā)給了醫(yī)院方面，敦促落實(shí)處理。
從市民發(fā)出求助，到事情順利解決，前后花了不到兩個(gè)小時(shí)。
“深圳人比較務(wù)實(shí)，沒(méi)有太多道理可以講。對(duì)我來(lái)說(shuō)，就是發(fā)了個(gè)電話給醫(yī)院，督促醫(yī)院落實(shí)。后面主要是醫(yī)院在處理，行動(dòng)力很強(qiáng)?！蓖鯉X告訴記者。
王嶺表示，后續(xù)深圳衛(wèi)健委將會(huì)繼續(xù)認(rèn)真做好封控管控區(qū)域的生活保障工作，充分運(yùn)用此前社區(qū)小區(qū)防控保障經(jīng)驗(yàn)，組建專門服務(wù)保障團(tuán)隊(duì)，開(kāi)通專門熱線電話，認(rèn)真做好糧食蔬菜、口罩等基本生活物資和防疫物資保障工作，對(duì)隔離人員中的“老幼病殘?jiān)小碧厥馊巳海瑢⒔ⅰ耙粚?duì)一”或“一對(duì)多”服務(wù)機(jī)制，加強(qiáng)心理疏導(dǎo)和人文關(guān)懷，特別是將統(tǒng)籌做好疫情防控和就醫(yī)服務(wù)保障工作，督促各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)不能以任何借口推諉拒收患者，對(duì)透析患者、放化療等腫瘤患者以及孕產(chǎn)婦、新生兒等急需就醫(yī)的，建立24小時(shí)值班值守制度，確保就診救治需求得到充分保障。
【經(jīng)過(guò)】
1月8日上午10:57，“深圳衛(wèi)健委”微信公眾號(hào)后臺(tái)收到市民求助，要到市民電話以后，轉(zhuǎn)交深圳市龍華區(qū)中心醫(yī)院進(jìn)行處理。
11:17，醫(yī)院門診部根據(jù)截圖中市民Prnliy在10:57發(fā)到公眾號(hào)留言中的電話號(hào)碼，與市民Prnliy聯(lián)系上，問(wèn)詢采樣的過(guò)程，并請(qǐng)Prnliy提供姓名與身份證號(hào)碼。
11:20，市民Prnliy發(fā)來(lái)兩個(gè)身份證號(hào)碼，在醫(yī)院未查詢到結(jié)果。
12:07，市民短信提示采樣點(diǎn)是“在大門進(jìn)來(lái)左邊往中醫(yī)科那條路”（指的是醫(yī)院核酸采樣點(diǎn)旁邊的臨時(shí)采樣點(diǎn)）。醫(yī)院發(fā)現(xiàn)，這是一個(gè)醫(yī)院設(shè)置的臨時(shí)采樣點(diǎn)，并非醫(yī)院為入院患者專門設(shè)置的采樣點(diǎn)，采樣后標(biāo)本被送到第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)。入院患者的都是由醫(yī)院自己實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的。
12:26，問(wèn)詢第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)回復(fù)：“結(jié)果已出，但因人手不足未經(jīng)審核，馬上審核?！?/p>
第6篇：核酸檢測(cè)情況范文
關(guān)鍵詞：諾如病毒；PCR；食源性疾?。粰z測(cè)技術(shù)
Abstract：Objective A laboratory investigation and analysis of school outbreaks of acute gastroenteritis caused by Norovirus was performed. Methods The method combined epidemiological investigation with laboratory testing was employed. A total of 40 samples includingswabs and feces of patients； food； condiments； smear samples of environment samples ； water samples were collected and utilized for RT-PCR detection and routine bacteriological testing. Results Norovirus nucleic acid were detected positive inswabs of six students， a health care teacher， three chefs and a feces sample， a food. Conclusion Norovirus inswab， feces and food can be detected quickly and effectively by RT-PCR.
Key words：Norovirus；PCR；Foodborne diseases；Detection technology
近年來(lái)，諾如病毒引起的急性胃腸炎暴發(fā)時(shí)有發(fā)生。諾如病毒可通過(guò)食物、水及人與人接觸而使人感染發(fā)病，若在學(xué)校及幼兒園等集體單位發(fā)生，則易引起群體性胃腸炎暴發(fā)。諾如病毒感染性腹瀉以起病急、傳播快、暴發(fā)多為特征，因該病的癥狀及其多在冬季流行率上升，故被稱為"胃腸道流感"或"冬季嘔吐病"[1]。本文針對(duì)2015年3月成都市成華區(qū)某小學(xué)發(fā)生的一起諾如病毒引起的聚集性急性胃腸炎，將相關(guān)實(shí)驗(yàn)室病原檢測(cè)情況及技術(shù)探討報(bào)告如下：
1 資料與方法
1.1臨床信息 學(xué)生聚集性病例的主要癥狀為嘔吐、腹瀉、腹痛、惡心，部分病例的血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果顯示白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞率增高。
1.2流行病學(xué)及衛(wèi)生學(xué)調(diào)查 患者均為在校學(xué)生及教師，有在校共同進(jìn)餐史，學(xué)校提供公用直飲水及生活用水。
1.3 樣本采集及其來(lái)源 根據(jù)流行病學(xué)信息，準(zhǔn)備的采樣物資包括病毒采樣管（北京友康）、自配滅菌1% NaCl肉湯、滅菌鹽水和腸道致病菌直劃平板（Mac、HE、TCBS）。采集病例肛拭8份、糞便樣1份、學(xué)校廚師肛拭8份、供餐食品留樣5份、調(diào)味品4份、環(huán)境涂抹樣16份及水樣2份（見(jiàn)表1）。
1.4實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 對(duì)采集的樣本進(jìn)行病毒學(xué)檢測(cè)和食物中毒常規(guī)致病菌檢測(cè)。用RT-PCR法檢測(cè)諾如病毒和輪狀病毒核酸；采用RT-PCR和細(xì)菌培養(yǎng)法檢測(cè)食物中毒常規(guī)致病菌：沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽孢桿菌、致瀉大腸埃希氏菌。
1.4.1 病毒檢測(cè)樣本處理 肛拭和糞便樣本無(wú)需前處理；對(duì)于食品樣本，采用無(wú)菌操作取適量（約5 g）樣本至病毒采樣管內(nèi)（若有體積較大的食材，則用滅菌剪刀剪碎后放入），充分振搖后，靜置待用。
1.4.2 細(xì)菌DNA 的提取及檢測(cè) 取樣本鹽水管上清液1mL，12000rpm離心5min后棄上清。沉淀加入滅菌水50μL，將其懸浮后100℃煮沸5min，12000rpm離心2min，取上清用于PCR反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)采用達(dá)安生物科技有限公司提供的沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽孢桿菌、致瀉大腸埃希氏菌核酸檢測(cè)試劑盒，按說(shuō)明書加入5μL核酸提取物，在ABi Step-one plus PCR擴(kuò)增儀依程序進(jìn)行40次循環(huán)擴(kuò)增，并檢測(cè)。
1.4.3病毒RNA 的提取及檢測(cè) 選用天隆核酸提取試劑盒（磁珠法）（Ex-RNA/DNA 病毒2.0）提取病毒RNA。取各樣本上清液200μL，按說(shuō)明書加入10μL Proteinase K，4μL Acryl Carrier，放入天隆NP 968核酸提取儀依程序自動(dòng)提取。RT-PCR采用達(dá)安生物科技有限公司的A、B、C 組輪狀病毒核酸、諾如病毒核酸檢測(cè)試劑盒，取核酸提取物5μL，加入PCR反應(yīng)管，放入ABi Step-one plus PCR擴(kuò)增儀依程序擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，并檢測(cè)。
1.4.4 細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)法常規(guī)檢測(cè) 按照WS 271-2007、GB 4789-2010方法進(jìn)行沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽孢桿菌、致瀉大腸埃希氏菌、變形桿菌、椰毒假單胞菌等病原菌的檢測(cè)。
2結(jié)果
2.1細(xì)菌PCR檢測(cè) 擴(kuò)增曲線均無(wú)明顯指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期，表明樣本中未檢出目標(biāo)菌核酸。
2.2病毒RT-PCR檢測(cè) RT-PCR結(jié)果表明，6名學(xué)生、1名保健教師、3名食堂廚師的肛拭樣本和1個(gè)糞便樣本、1個(gè)食品樣本（炒榨菜）中檢出諾如病毒；所有樣本中均未檢出輪狀病毒（見(jiàn)表2）。
注：打"/"號(hào)為該樣品未開(kāi)展檢測(cè)此項(xiàng)檢測(cè)。
2.3細(xì)菌學(xué)培養(yǎng) 細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)結(jié)果顯示，樣本均未檢出目標(biāo)菌。
2.4疫情控制 臨床資料、流行病學(xué)調(diào)查資料和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果顯示，從食品加工者、食品及用餐者檢測(cè)出諾如病毒，構(gòu)成一條出清晰的傳播鏈。因此，此次疫情判定為諾如病毒引起的聚集性疫情，可能系諾如病毒污染學(xué)校供餐食品所致。明確診斷和進(jìn)行疫情分析后，疾控中心繼續(xù)開(kāi)展調(diào)查，指導(dǎo)并督促學(xué)校落實(shí)疫情控制措施，停止食用污染的食品，對(duì)相關(guān)區(qū)域進(jìn)行了消毒，對(duì)帶病毒廚師調(diào)離食品加工崗位，繼續(xù)開(kāi)展癥狀監(jiān)測(cè)、病例搜索等防控措施。對(duì)住院病例進(jìn)行有針對(duì)性治療。截止疫情發(fā)生后第3d，住院病例相繼痊愈出院，未發(fā)現(xiàn)新發(fā)病例，疫情得到有效控制。
3 討論
3.1在17例病例的臨床檢驗(yàn)結(jié)果中，有5例血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果顯示中性粒細(xì)胞率增高，淋巴細(xì)胞率降低，部分患者白細(xì)胞總數(shù)增高。一般情況，接診醫(yī)院會(huì)做出胃腸道細(xì)菌型感染診斷，但檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室不應(yīng)輕易排除對(duì)病毒的采樣、檢測(cè)。
3.2此次事件共采集了40個(gè)樣本，包括肛拭、糞便、食品、調(diào)味品、環(huán)境涂抹樣、水樣等不同的樣本類型，樣本容器包括病毒采樣管、1% NaCl肉湯采樣管、滅菌鹽水采樣管和Mac、HE、TCBS致病菌直劃平板?？茖W(xué)、適度、合理的采集樣本可提高病原微生物的檢出率。
3.3諾如病毒的檢測(cè)目前主要采用RT-PCR 技術(shù)，國(guó)內(nèi)食品類檢測(cè)研究?jī)H限于牡蠣等貝類樣本， 尚未見(jiàn)蔬菜、水果等其他食品的病毒檢測(cè)方法報(bào)道。另外，食品樣本一般體積大，病毒含量少，樣本處理、病毒富集是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的關(guān)鍵點(diǎn)，也是難點(diǎn)。一般采用有機(jī)絮凝沉淀法進(jìn)行富集[3]。但無(wú)論是PEG沉淀法，還是Trizol抽提法，過(guò)程都比較繁瑣、用時(shí)長(zhǎng)，加之多數(shù)基層疾控中心現(xiàn)階段并未配備相關(guān)設(shè)備和耗材，因此無(wú)法進(jìn)行病毒富集。在此次檢測(cè)中，我們根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判斷病毒含量可能比較大，所以采用均質(zhì)后靜置，取上清液直接進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示多個(gè)樣本諾如病毒陽(yáng)性。這表明在樣本數(shù)量足夠、污染病毒量大且成分單一的情況下，本方法對(duì)于突發(fā)公共衛(wèi)生事件的快速檢測(cè)有一定的可行性。
3.4 與常規(guī)培養(yǎng)方法相比，PCR技術(shù)用于病原微生物檢測(cè)具有靈敏、快速、檢出率高等優(yōu)勢(shì)。目前，該技術(shù)的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。此次采用PCR法檢出以諾如病毒為代表的腸道致瀉病毒，為聚集性胃腸炎的病因診斷提供了有力證據(jù)。
3.5對(duì)于基層疾控中心來(lái)說(shuō)，病原微生物的富集、檢測(cè)等基礎(chǔ)設(shè)備設(shè)施的匱乏給檢測(cè)帶來(lái)了一定的難度，特別是中西部地區(qū)的基層疾控中心應(yīng)加強(qiáng)檢測(cè)能力的建設(shè)。
參考文獻(xiàn)：
[1] GUREMONT E，BRASSARD J，HOUDE A，et al.Development of an extraction and concentration procedure and comparison of RT-PCR primer systems for the detection of hepatitis A virus and norovirus GII in green onions[J].J Virol Meth， 2006， 134（1-2）：130-135 .
第7篇：核酸檢測(cè)情況范文
1免疫學(xué)的方法
在食品微生物的檢測(cè)當(dāng)中免疫學(xué)技術(shù)主要是建立在抗原、抗體特異性結(jié)合的反應(yīng)基礎(chǔ)上,并且以免疫放大技術(shù)為輔,利用病原體刺激生成免疫球蛋白。這種方法的優(yōu)勢(shì)在于不需要進(jìn)行樣品選擇性增菌之后分離,就可直接進(jìn)行篩選,具備了靈敏度高的特點(diǎn),按照檢測(cè)方法的差異可以分為凝集反應(yīng)、免疫擴(kuò)散反應(yīng)和免疫熒光反應(yīng)等。
1.1凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)從本質(zhì)上來(lái)講也是利用抗原、抗體相結(jié)合的原理,將特異性抗體包被于乳膠顆粒之上,進(jìn)而產(chǎn)生了肉眼可見(jiàn)、便于觀察的凝集反應(yīng)。這種方法因其特異性需要獲得較純的細(xì)菌培養(yǎng)物,然后使培養(yǎng)物和致敏乳膠發(fā)生反應(yīng),通常應(yīng)用于大腸桿菌類細(xì)菌中H7和O157的鑒定。
1.2免疫擴(kuò)散反應(yīng)免疫擴(kuò)散反應(yīng)的本質(zhì)是生成一種不溶性的抗原、抗體復(fù)合物,是將抗體放入固體或者液體的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),生成一種肉眼可見(jiàn)的沉淀性物質(zhì),這種反應(yīng)需要在特定培養(yǎng)基中進(jìn)行,在實(shí)際的食品微生物檢測(cè)方法中,應(yīng)用了這一技術(shù)的有VIP免疫擴(kuò)散的試劑條還有Salmonella1-2的TestTM,這一類產(chǎn)品在實(shí)際當(dāng)中應(yīng)用也頗為廣泛。
1.3免疫熒光反應(yīng)免疫熒光學(xué)反應(yīng)的本質(zhì)是一種免疫學(xué)標(biāo)記技術(shù),利用熒光素對(duì)檢測(cè)抗原或者抗體進(jìn)行標(biāo)記,而后產(chǎn)生的特異性抗原反應(yīng)能夠形成帶有熒光的抗原、抗體結(jié)合物,在儀器中得到檢驗(yàn)。這種方法在實(shí)際應(yīng)用的過(guò)程中按情況不同可以分為直接方法和間接方法。直接方法就是直接在檢測(cè)的樣品上滴加已知特異性的熒光標(biāo)記抗血清,在洗滌之后進(jìn)行觀察。間接方法就是將細(xì)菌特異性抗體上滴加在檢測(cè)樣本上,經(jīng)過(guò)反應(yīng)后再洗滌,然后加入熒光標(biāo)記第二抗體,實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。這種方法因其熒光性更加有利于觀察,也因其特異性主要適用于沙門氏菌、葡萄球菌、李斯特菌以及單核細(xì)胞增生的李斯特氏菌等方面的檢測(cè)。
2分子生物學(xué)法
2.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)是一種體外的選擇性DNA或RNA擴(kuò)增技術(shù)。其根本目的就是將人工無(wú)法培養(yǎng)出的微生物進(jìn)行相應(yīng)DNA或者RNA的片段擴(kuò)增,通過(guò)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的含量來(lái)快速檢測(cè)飼料當(dāng)中存在的致病菌含量。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)簡(jiǎn)稱為PCR,可以直接對(duì)樣品當(dāng)中的肉毒梭菌、大腸桿菌、乳酸桿菌和痢疾桿菌進(jìn)行檢測(cè),PCR能夠克服核酸定量敏感性低的缺點(diǎn),分析出極為微量的DNA,對(duì)任何模板的標(biāo)本都能夠?qū)崿F(xiàn)定量擴(kuò)增及分析。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)克服了基因探針技術(shù)靈敏度不高的缺陷,其中引入的Taq聚合酶還能夠簡(jiǎn)化反應(yīng)程序,實(shí)現(xiàn)半自動(dòng)化。以同位素標(biāo)記基因探針的PCR反應(yīng)為例,這種方法應(yīng)用于水源E.Coli的檢測(cè),能夠使檢測(cè)量達(dá)到100%,能夠快速檢驗(yàn)出食品當(dāng)中帶有污染的病原,并能夠保證其準(zhǔn)確性。美國(guó)杜邦快利康公司已經(jīng)建立了BAX+病原菌的檢測(cè)系統(tǒng),PCR技術(shù)在細(xì)菌檢測(cè)方面的應(yīng)用前景十分廣闊。
2.2核酸探針技術(shù)核酸探針本身是一種帶標(biāo)記的DNA特異性片段,核酸探針技術(shù)的原理是利用堿基互補(bǔ)的原則,使核酸探針和目的DNA進(jìn)行雜交,最終以特定方法進(jìn)行標(biāo)記物測(cè)定,核算探針技術(shù)大致可以分為非放射性標(biāo)記和放射性標(biāo)記兩大類。核酸探針具有特異性。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法都是以基因表達(dá)產(chǎn)物為檢測(cè)目標(biāo),會(huì)受到多種因素的干擾,檢測(cè)病毒要在組織培養(yǎng)之后對(duì)蛋白質(zhì)的囊膜進(jìn)行檢測(cè),還須采取超低溫的保存技術(shù),但仍然會(huì)因其一些編碼蛋白的基因變化,核算探針則避免了這一復(fù)雜的程序,無(wú)需改變目的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),更方便應(yīng)用。但是要注意這其中要將RNA除外,因?yàn)镽NA探針不耐受堿處理,需要采取不同的方法來(lái)制備出檢測(cè)用的RNA。核酸探針特異性主要取決于使用條件和堿基序列,還會(huì)受到探針長(zhǎng)度的影響,其敏感性主要受標(biāo)記系統(tǒng)和探針本身的控制,延長(zhǎng)培養(yǎng)的時(shí)間也能夠提高探針靈敏度。在當(dāng)前的核酸探針應(yīng)用過(guò)程中還存在一些問(wèn)題,要實(shí)現(xiàn)更快更簡(jiǎn)潔的制備還需要一段時(shí)間的研究和探討,逐步克服因待檢菌種繁多而產(chǎn)生的核酸探針制備問(wèn)題,突破局限性。
3結(jié)語(yǔ)
第8篇：核酸檢測(cè)情況范文
【關(guān)鍵詞】乙肝；病毒感染；血清；乳汁；核酸檢測(cè)；病毒檢測(cè)
乙肝是我國(guó)常見(jiàn)的傳染性疾病，母嬰途徑是其重要的傳播方式。作為嬰兒最為理想的食物，母乳是否具有傳播乙肝病毒的作用目前還存在著一定的爭(zhēng)議，有研究認(rèn)為約有（30-50）%的乙肝病毒慢性攜帶者由母嬰途徑引起［1］。本研究通過(guò)對(duì)92例血清HBV-Ag陽(yáng)性的孕產(chǎn)婦血清及乳汁病毒核酸進(jìn)行檢測(cè)和分析，現(xiàn)報(bào)告如下：
1資料與方法
1.1臨床資料選取2007年1月-2011年11月期間我院收治的乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦92例，年齡（28-43）歲，平均（29.17±3.82）歲；孕（37-41）周，平均（39.16±0.42）周。所有孕產(chǎn)婦均為單胎妊娠，且為第一次妊娠。胎兒體重（2100-4500）g，平均（3273.73±637.26）g。所有產(chǎn)婦均未見(jiàn)明顯的臨床癥狀，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（0-40）U/L。采用Child-pugh法對(duì)肝功能進(jìn)行分級(jí)［2］，A級(jí)13例，B級(jí)39例，C級(jí)40例。剖宮產(chǎn)37例，自然分娩53例，陰道助產(chǎn)2例。
1.2方法采用ELISA檢測(cè)法對(duì)產(chǎn)婦血清及乳汁中乙肝標(biāo)志物進(jìn)行測(cè)定，并采用熒光定量多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法對(duì)血清以及乳汁中的HBV-DNA含量進(jìn)行測(cè)定。于產(chǎn)婦分娩前采取清晨空腹外周血3ml，放置10min后以6000r/min進(jìn)行離心10min。取50ul放入Eppendorf管，并加入50ulDNA提取液充分打勻，放入100℃干式恒溫器10min，然后進(jìn)行10min離心，轉(zhuǎn)速為10000r/min。取5ul行PCR檢測(cè)。產(chǎn)婦分娩3d后收集3ml初乳，以10000r/min進(jìn)行離心10min，去除上層油脂后吸取100ul下層乳汁放入無(wú)菌微量離心管，加入100ul100g/L聚乙二醇液混勻，并在4℃下進(jìn)行10000r/min離心15min，拋棄上清液。加入50ul滅菌雙蒸水，將沉淀進(jìn)行充分溶解，并加入DNA提取液，充分混勻。將上述標(biāo)本放置于冰箱以4℃冷藏過(guò)夜，然后吸取750ul乳汁注入Eppendorf管進(jìn)行ELISA檢測(cè)和HBV-DNA定量檢測(cè)。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，且以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1ELISA檢測(cè)結(jié)果92例患者中大三陽(yáng)24例（26.09%），小三陽(yáng)36例（39.13%），HBsAg以及HBcAb陽(yáng)性32例（34.78%）。
2.2HBV-DNA檢測(cè)各組患者乳汁HBV-DNA陽(yáng)性率均低于血清檢出率，但是差別并不明顯（P＞0.05）。大三陽(yáng)組患者血清、乳汁HBV-DNA檢出率明顯高于其他兩組，且其病毒載量明顯高于其他兩組（P＜0.05）。且隨著血清病毒載量的升高，乳汁病毒載量也相應(yīng)升高，兩者成正相關(guān)（r=0.853，P＜0.05），見(jiàn)表1。
3討論
乙型肝炎是一種嚴(yán)重危害人類健康的全球性疾病，在我國(guó)乙肝病毒攜帶率高達(dá)（10-15）%，每年更是有超過(guò)百萬(wàn)的乙肝病毒攜帶者分娩，母嬰傳播是乙肝病毒進(jìn)行傳播的重要途徑。母乳中不僅富含優(yōu)質(zhì)蛋白、乳糖、維生素以及飽和脂肪酸，而且可以有效提高嬰兒抵抗力，促進(jìn)其健康成長(zhǎng)［3］。但是乙肝表面抗原陽(yáng)性產(chǎn)婦是否可以進(jìn)行母乳喂養(yǎng)一直以來(lái)都存在著較大的爭(zhēng)議。
乙肝病毒核酸是病毒具有傳染性的最為直接的標(biāo)志，其拷貝數(shù)量直接衡量著傳染性的強(qiáng)弱，也是衡量治療效果的重要指標(biāo)［4］。本研究中乳汁HBV-DNA的檢出率略低于血清，但是差異并不明顯。大三陽(yáng)患者血清以及乳汁病毒核酸載量明顯高于其他患者，且乳汁病毒核酸載量隨著血清載量的升高而升高。這些都說(shuō)明，乙肝病毒攜帶患者其體內(nèi)HBV仍然處于較為活躍的復(fù)制期，在這種情況下，產(chǎn)婦進(jìn)行母乳喂養(yǎng)應(yīng)各位謹(jǐn)慎。條件允許時(shí)可以對(duì)血清以及乳汁中病毒核酸進(jìn)行檢測(cè)以確定喂養(yǎng)方式，如果條件不允許，則應(yīng)放棄母乳喂養(yǎng)。
參考文獻(xiàn)
［1］曾定元，莫可良，賀紅英，等.聯(lián)合免疫后乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦母乳喂養(yǎng)安全性的探討［J］.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2006，18（2）：125-127.
［2］刑榮春，鄭軍，肖建華.Child-Pugh分級(jí)的發(fā)展及臨床應(yīng)用［J］.山東醫(yī)藥，2011，55（52）：114-115.
第9篇：核酸檢測(cè)情況范文
摘要在CIK細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中加入卡介菌多糖核酸，研究其對(duì)CIK細(xì)胞體外增殖及殺瘤活性等方面的影響.CCK8檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)低濃度卡介菌多糖核酸處理的CIK細(xì)胞相比對(duì)照組（生理鹽水），細(xì)胞增殖能力和殺瘤效果都顯著上調(diào).RTqPCR結(jié)果顯示卡介菌多糖核酸處理后的CIK細(xì)胞毒活性相關(guān)因子（Granzyme B， IFNγ， TNFα和TNFβ）mRNA的表達(dá)相比對(duì)照組都有提高.這些結(jié)果可為培養(yǎng)具有更高效殺瘤活性又能大量擴(kuò)增的CIK細(xì)胞提供新思路.
關(guān)鍵詞卡介菌多糖核酸；CIK；細(xì)胞增值；殺瘤活性
中圖分類號(hào)Q78文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)10002537（2017）02003306
The Impact of BCGPSN on the Activity of CIK Cells
HUANG Zhaoqin1， SU Renxiang1， ZHONG Beifen1， HAN Huimin2， GU Zhixin2， YAN Donglan2， XIN Xiu2， YUAN Li2， HU Xiang1，2*
（1.Key Laboratory of Protein Chemistry and Developmental Biology of State Education Ministry of China，
College of Life Science， Hunan Normal University， Changsha 410081， China；
2.Jiuzhitang Limited Share Company Postdoctoral Workstation， Changsha 410205， China）
AbstractThe BCG polysaccharide and nucleic acid （BCGPSN） was added to CIK cells to study CIK cells responses on the proliferation and tumoricidal activity in vitro. CCK8 results showed that the CIK cells treated with low dose BCGPSN， compared with control group （normal saline）， were significantly enhanced on the proliferation and tumoricidal activity. RTqPCR results revealed that the expression of CIK Granzyme B， IFNγ， TNFα， TNFβ mRNA of BCGPSN group was higher than that of the control group. These results lay the foundation for how to cultivate a large number of CIK cells with high tumoricidal activity， and provide new ideas for the therapy of antitumor adoptive immunity.
Key wordsBCGPSN； CIK cell； cell proliferation；tumoricidal activity
盒災(zāi)琢鲅現(xiàn)匚：θ死嘟】擔(dān)目前常規(guī)的手術(shù)和放化療治療方法均不能徹底清除體內(nèi)的瘤細(xì)胞，過(guò)繼免疫治療法因具有符合生理、低毒和高效等優(yōu)點(diǎn)成為重要的腫瘤輔助治療手段[1].其中，細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（cytokineinduced killer cells， CIK細(xì)胞）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種非常有前景的過(guò)繼免疫細(xì)胞，具有增殖迅速、殺瘤活性廣譜且高效、毒副作用微小等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)成為腫瘤免疫治療領(lǐng)域的一種新選擇[24].CIK是以CD3+CD56+ T細(xì)胞為主的異質(zhì)細(xì)胞群，兼有 NK 細(xì)胞和 T 細(xì)胞的特征.在功能上，CIK 一方面擁有 T 淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活性，另一方面還擁有 NK 細(xì)胞非 MHC 限制性的殺傷腫瘤的特點(diǎn)，其增殖迅速、對(duì)正常造血影響輕微[5].CIK細(xì)胞的增殖和細(xì)胞毒活性依賴于多種外源性細(xì)胞因子的刺激，但何種因子組合為最佳尚無(wú)定論，因此研究如何進(jìn)一步提高CIK的增殖和殺瘤活性已經(jīng)成為抗腫瘤的過(guò)繼免疫細(xì)胞生物治療的一個(gè)熱點(diǎn)[6].
卡介菌多糖核酸（BCG polysaecharide and nucleis acid，BCGPSN）是在卡介苗的基礎(chǔ)上，通過(guò)熱酚法提取卡介菌中的多糖、核酸，混合而制成的免疫活性物質(zhì)，是我國(guó)首創(chuàng)的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型免疫調(diào)節(jié)劑[78].BCGPSN 能誘導(dǎo)多種免疫細(xì)胞的活化，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子的分泌，可作為一種較好的腫瘤輔助治療手段[9].
由于卡介菌多糖核酸能提高機(jī)體免疫力并且輔助提高腫瘤治療效果，同時(shí)CIK細(xì)胞亦是腫瘤過(guò)繼免疫治療的有效方法，且國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有BCGPSN聯(lián)合CIK進(jìn)行研究的相關(guān)報(bào)道，因此本課題將兩者結(jié)合起來(lái)研究.為研究卡介菌多糖核酸的生物活性及藥理作用，在CIK細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中加入卡介菌多糖核酸，研究其對(duì)CIK細(xì)胞的體外增殖及對(duì)肝癌細(xì)胞的毒活性（殺瘤活性）方面的影響，并且探討其對(duì)CIK細(xì)胞毒活性相關(guān)因子表達(dá)的影響.
1.材料與方法
1.1材料
淋巴細(xì)胞分離自健康志愿者外周血.SMMC7721肝癌細(xì)胞系于上海中科院購(gòu)買，本實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期保存.斯奇康卡介菌多糖核酸注射液（1 mL/支）購(gòu)自湖南九芝堂制藥公司.人血液淋巴細(xì)胞分離液購(gòu)自佳和生物.采血針、采血管、生理鹽水購(gòu)自長(zhǎng)沙市第四人民醫(yī)院.人源CD3單抗購(gòu)自北京同立源生物科技有限公司，人白介素（IL2）買自江蘇金絲利藥業(yè)有限公司.DMEM培養(yǎng)液、RPMI1640和GTT551培養(yǎng)液，以及胎牛血清均為美國(guó)Gibco公司產(chǎn)品.青霉素鏈霉素溶液產(chǎn)自碧云天.
1.2方法
1.2.1CIK細(xì)胞分離及原代培養(yǎng)采集健康志愿者血液20 mL，平衡溫度至室溫.取50 mL離心管若干，將血樣轉(zhuǎn)移至離心管，用生理鹽水稀釋至30 mL，充分吹打均勻.將稀釋后的血樣緩緩加入另一管裝有15 mL 淋巴細(xì)胞分離液的上方，形成上下兩相.22 ℃，390 g離心30 min（加速1，剎車0）.離心后血漿層與分離液之間有白膜層可見(jiàn)，分別收集上層血漿和中間白膜層至新的離心管.于收集白膜層的離心管中加入RPMI1640至45 mL，混勻，22 ℃，1 000 g離心10 min（加速9，剎車9）.重復(fù)上一步驟兩次，離心速度分別改為400 g和201 g，最后一次離心之前取20 μL混勻的細(xì)胞懸液進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，參照《細(xì)胞計(jì)數(shù)SOP》.離心后重懸細(xì)胞，按細(xì)胞數(shù)5×106個(gè)/mL加含有500 μg/L CD3 mAB， 1 000 U/mL IL2和10%FBS的GTT551培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)成CIK細(xì)胞.
1.2.2腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)在37 ℃，5%CO2及90%相對(duì)濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中用DMEM完全培養(yǎng)液（含10%胎牛血清和100 mg/L青鏈霉素溶液）培養(yǎng)SMMC7721細(xì)胞.
1.2.3CCK8 檢測(cè)細(xì)胞增殖活力將培養(yǎng)7 d的CIK細(xì)胞數(shù)調(diào)整至2×106 個(gè)/mL，于96 孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入細(xì)胞懸液50 μL，設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，對(duì)照組為生理鹽水組，實(shí)驗(yàn)組分為5組，分別加入卡介菌多糖核酸終濃度為1，10，50，100，200 mL/L的培養(yǎng)基各50 μL，每個(gè)濃度4個(gè)平行對(duì)照孔，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中處理細(xì)胞72 h，加入10 μL CCK8溶液，4 h 后用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)OD450值A(chǔ)（吸光度的大小與活細(xì)胞的數(shù)量呈正比）.并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.以BCGPSN 濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，作細(xì)胞增殖曲線.
1.2.4腫瘤殺傷實(shí)驗(yàn)將培養(yǎng)9 d的CIK細(xì)胞均分為兩組，分別為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組為生理鹽水組，實(shí)驗(yàn)組為培養(yǎng)基終濃度為10 mL/L的卡介菌多糖核酸，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中處理細(xì)胞72 h（至12 d）.另外，在CIK細(xì)胞培養(yǎng)11 d時(shí)，將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SMMC7721細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞密度為1×105 個(gè)/mL，于96孔板中鋪板每孔100 μL細(xì)胞懸液，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h.CIK培養(yǎng)至第12天進(jìn)行CIK殺傷腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，棄去SMMC7721舊的培養(yǎng)液，分別按n（效應(yīng)細(xì)胞）/n（靶細(xì)胞）為5∶1，10∶1和20∶1調(diào)整兩組CIK細(xì)胞至相應(yīng)數(shù)目加入SMMC7721細(xì)胞孔中，每個(gè)比例3個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)單獨(dú)靶細(xì)胞和單獨(dú)效應(yīng)細(xì)胞對(duì)照組，于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h. 4 h后每孔加入10 μL CCK8溶液，細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育4 h，酶標(biāo)儀測(cè)定OD450值A(chǔ).計(jì)算殺傷率：殺傷率（%）=[1-（實(shí)驗(yàn)組A值-單獨(dú)效應(yīng)細(xì)胞組A值）/單獨(dú)靶細(xì)胞組A值]×100%.
1.2.5細(xì)胞總RNA的提取及cDNA的合成
（1）卡介菌多糖核酸處理CIK細(xì)胞：調(diào)整培養(yǎng)至第9天的CIK細(xì)胞數(shù)目至2×106 個(gè)/mL，于6 孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入細(xì)胞懸液1 mL，設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組加入卡介菌多糖核酸終濃度為10 mL/L的培養(yǎng)基1 mL，對(duì)照組加入生理鹽水，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h.
（2）RNA提取及反D錄：按TRIZOL法提取CIK細(xì)胞總RNA，按照Takara反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書操作，將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA.
1.2.6實(shí)時(shí)定量PCR
（1）引物的設(shè)計(jì)與合成：根據(jù)GenBank中基因的序列，查找文獻(xiàn)并用Primer Primer 5 軟件設(shè)計(jì)CIK相關(guān)毒活性因子Granzyme B，TNFα，TNFβ，IFNγ，Actin（內(nèi)參）基因引物（見(jiàn)表1）.將設(shè)計(jì)好的目的引物序列發(fā)給上海生工公司合成.
（2）引物驗(yàn)證：引物合成后，加入滅菌水溶解至10 μmol/L.先做一個(gè)普通PCR檢測(cè)引物是否能克隆出目的片段，PCR反應(yīng)體系如表2，按照體積從大到小加溶液至總體積為20 μL.
PCR體系加完后用槍輕輕混勻，放入PCR儀擴(kuò)增片段.擴(kuò)增條件為：94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性30 s，60 ℃復(fù)性30 s，72 ℃延伸30 s，重復(fù)29個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min.用2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR反應(yīng)完成后產(chǎn)物.
（3）熒光定量PCR：反應(yīng)體系見(jiàn)表3，共30 μL，具體操作按照Takara SYBR RTqPCR產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行.
1.2.7統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件及Graphpad軟件進(jìn)行方差及顯著性分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)（P）設(shè)為0.05.
2結(jié)果與分析
2.1CIK細(xì)胞形態(tài)觀察
CIK細(xì)胞即細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞，它是從人血液分離出來(lái)的單核淋巴細(xì)胞經(jīng)IL2和CD3單抗等細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生的以CD3+CD56+ T細(xì)胞為主的異質(zhì)細(xì)胞群.CIK是一種懸浮細(xì)胞，相比癌細(xì)胞其體積較小.經(jīng)過(guò)適應(yīng)期的CIK細(xì)胞隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)量對(duì)數(shù)生長(zhǎng)且會(huì)形成細(xì)胞球，細(xì)胞體積在7～12 d時(shí)有所增大，之后幾乎不變.圖1是顯微鏡下不同時(shí)期的CIK細(xì)胞形態(tài)，A～D分別對(duì)應(yīng)從人血中分離后培養(yǎng)至1，4，7，11 d的CIK細(xì)胞.
2.2卡介菌多糖核酸對(duì)CIK細(xì)胞增殖的影響
在CIK細(xì)胞培養(yǎng)至第7天時(shí)，加入不同濃度的卡介菌多糖核酸處理細(xì)胞72 h，然后用CCK8試劑盒檢測(cè)CIK細(xì)胞活性.分析數(shù)據(jù)結(jié)果，以不同BCGPSN濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作量效曲線圖，結(jié)果如圖2所示.由圖可知，隨著B(niǎo)CGPSN濃度的增加，吸光度呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，在BCGPSN濃度增加到10 mL/L時(shí)，CIK活細(xì)胞數(shù)目最多，吸光度最大且明顯高于未加藥組，統(tǒng)計(jì)分析差異有意義（*p
2.3卡介菌多糖核酸對(duì)CIK細(xì)胞殺傷活性的影響
為了驗(yàn)證卡介菌多糖核酸對(duì)CIK細(xì)胞殺瘤活性有影響，筆者將培養(yǎng)至第9天的CIK細(xì)胞加入卡介菌多糖核酸處理72 h（至12 d），再進(jìn)行CIK殺傷SMMC7721腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn).殺傷率統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖3.結(jié)果顯示，無(wú)論是實(shí)驗(yàn)組還是對(duì)照組，隨著效靶比增大CIK細(xì)胞殺傷腫瘤效果增強(qiáng)；相比對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組CIK細(xì)胞在效靶比為5∶1和10∶1時(shí)殺傷率有顯著提高（*p
2.4BCGPSN對(duì)CIK細(xì)胞毒活性相關(guān)因子RNA表達(dá)的影響
收集生理鹽水和10 mL/L的卡介菌多糖核酸處理72 h的兩組CIK細(xì)胞，提取RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，做熒光定量PCR檢測(cè)CIK細(xì)胞毒活性相關(guān)因子的表達(dá).瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)CIK細(xì)胞RNA質(zhì)量，可看到28S和18S兩條清晰的帶，如圖4.RTqPCR結(jié)果顯示BCGPSN實(shí)驗(yàn)組CIK細(xì)胞Granzyme B（顆粒酶B），TNFα，TNFβ的mRNA表達(dá)量較對(duì)照組明顯升高（*p
Mark：DNA standard marker；1：對(duì)照組CIK細(xì)胞RNA；2：BCGPSN實(shí)驗(yàn)組CIK細(xì)胞RNA.
3討論
卡介菌多糖核酸是從卡介菌中提取的核酸、多糖等活性物質(zhì)混合而成的免疫增強(qiáng)劑，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫水平、增強(qiáng)機(jī)體抗感染和抗過(guò)敏的能力[10]，還可促進(jìn)T 淋巴細(xì)胞的增殖與活化及輔助提高機(jī)體內(nèi)NK殺傷活力[11].於敏等[12]研究表明卡介菌多糖核酸能顯著提高斷奶仔豬外周血淋巴細(xì)胞分化增殖，推測(cè)其可通過(guò)直接作用于外周血淋巴細(xì)胞從而增強(qiáng)個(gè)體免疫力.本研究結(jié)果表明低濃度卡介菌多糖核酸可顯著促進(jìn)體外培養(yǎng)的CIK細(xì)胞增殖分化，而在機(jī)體免疫應(yīng)答過(guò)程中，T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的激活、分化、增殖起著重要的作用，因此，卡介菌多糖核酸或可通過(guò)直接作用于人周血淋巴細(xì)胞從而增強(qiáng)機(jī)體免疫力.
卡介菌多糖核酸影響CIK細(xì)胞的體外增殖及CIK殺傷肝癌細(xì)胞的特點(diǎn)尚無(wú)報(bào)道.SMMC7721肝癌細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室常用細(xì)胞系，材料易得且細(xì)胞個(gè)體大、生長(zhǎng)較快易于實(shí)驗(yàn)，因此在此文中筆者選擇其作為CIK的靶細(xì)胞進(jìn)行殺傷實(shí)驗(yàn).研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)BCGPSN處理后的CIK細(xì)胞相比對(duì)照組殺瘤效果有明顯增加，在效靶比為5∶1和10∶1時(shí)殺傷率有顯著提高，在靶效比為20∶1時(shí)殺傷率也比對(duì)照組稍高，表明卡介菌多糖核酸能提高CIK的殺傷能力.
CIK殺傷腫瘤細(xì)胞的具體機(jī)制還并不清楚，根據(jù)之前相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道，筆者猜測(cè)可能與相關(guān)毒活性因子的表達(dá)相關(guān)，于是做熒光定量PCR檢測(cè)了實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組處理后的CIK細(xì)胞Granzyme B，TNFα，TNFβ和IFNγ的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這幾類因子的RNA表達(dá)水平的確有所提高.Granzyme B，TNFα，TNFβ和IFNγ這幾種因子在CIK細(xì)胞殺瘤過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，本研究也證實(shí)了其RNA表達(dá)升高促進(jìn)了CIK殺瘤效果.為了進(jìn)一步驗(yàn)證它們?cè)诘鞍姿降谋磉_(dá)，后續(xù)將購(gòu)買TNFα和IFNγ的ELISA試劑盒以檢測(cè)其在CIK細(xì)胞的胞外分泌情況.
顆粒酶B（Granzyme B）是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）和自然殺傷（NK）細(xì)胞顆粒中絲氨酸蛋白酶家族中發(fā)揮殺傷作用的主要效應(yīng)分子，它能進(jìn)入靶細(xì)胞，激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，迅速引起靶細(xì)胞DNA的斷裂，使細(xì)胞快速凋亡[13].因此，它是殺傷細(xì)胞的標(biāo)志性分子之一.
腫瘤壞死因子 （Tumor Necrosis Factor， TNF ）是一類重要的細(xì)胞因子，包括TNFα和TNFβ兩類，TNFα由巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)生，而TNFβ則由活化的T細(xì)胞分泌[14].TNF具有廣泛的生物學(xué)活性，對(duì)腫瘤細(xì)胞有強(qiáng)烈的殺傷作用，還能刺激T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞使其功能增強(qiáng).本研究結(jié)果顯示，相比生理鹽水對(duì)照組，卡介菌多糖核酸能顯著提高TNFα及TNFβ的mRNA表達(dá)量.
γ干擾素（Interferonγ，IFNγ）是I型o助T細(xì)胞（Th1細(xì)胞）的標(biāo)志性細(xì)胞因子，能抑制腫瘤細(xì)胞分裂，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞及 NK 細(xì)胞的殺傷性.另外γ干擾素還可增加巨噬細(xì)胞對(duì)抗原的吞噬，調(diào)動(dòng)機(jī)體免疫系統(tǒng)，提高NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷以及T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的激活，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答能力[15].
CIK是目前應(yīng)用最廣泛的腫瘤過(guò)繼免疫治療細(xì)胞，因其治療效果與細(xì)胞輸注劑量、效應(yīng)細(xì)胞比例和對(duì)腫瘤細(xì)胞毒性有著密切關(guān)系，因此提高其體外的增殖效率和毒性是首要解決的問(wèn)題.本研究證實(shí)低濃度下的卡介菌多糖核酸能促進(jìn)CIK細(xì)胞增殖，又能提高CIK的殺瘤效果，說(shuō)明卡介菌多糖核酸可以作為一種較好的腫瘤輔助治療藥物.另外CIK細(xì)胞殺瘤效率提高的同時(shí)相關(guān)毒活性因子的表達(dá)也增加，揭示其可能是殺傷腫瘤細(xì)胞的途徑之一，這也為進(jìn)一步研究CIK殺傷腫瘤細(xì)胞機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為抗腫瘤過(guò)繼免疫治療提供一些新思路.
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