乳疾靈片內(nèi)淫羊藿苷含量檢測
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本文作者：明延波1 孟祥軍2 呂潔1 作者單位：1.遼寧衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院 2.沈陽醫(yī)學(xué)院
乳疾靈片淫羊藿、赤芍、丹參、青皮、牡蠣、海藻等12味中藥材，經(jīng)加工制成的片劑，乳疾靈顆粒收載于中國藥典一部及部頒標(biāo)準(zhǔn)，我們在此基礎(chǔ)上，改變劑型制備成片劑，乳疾靈片具有舒肝解郁，散結(jié)消癰之功效，臨床上用于肝郁氣滯、痰淤互結(jié)所致的乳癖。為了保證產(chǎn)品質(zhì)量，選擇測定淫羊藿苷作為質(zhì)量控制的一個(gè)指標(biāo)。淫羊藿苷為淫羊藿中的主要活性成分［1］，有關(guān)淫羊藿苷的測定方法，文獻(xiàn)報(bào)道有薄層掃描法［2－3］、高效液相色譜法［4－5］等，本文采用分離效果好、專屬性強(qiáng)的HPLC法，通過研究提取工藝和優(yōu)化色譜條件測定了其中淫羊藿苷的含量，結(jié)果滿意，重現(xiàn)性好，可用于本制劑的質(zhì)量控制。
1儀器與試藥
1.1儀器
高效液相色譜儀(UV200Ⅱ大連依利特科學(xué)儀器有限公司);SrAdv Express色譜工作站;UV200Ⅱ檢測器。電子天平(AL2O4梅特勒－托利多上海稱重設(shè)備公司)。
1.2試藥
淫羊藿苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號:110659－200315，供含量測定用);乙腈(色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)總公司化工廠);其它試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱HypersilC18(250mm×4.6mm，5μm)，柱溫為室溫;以0.075mol/L磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH至4.5)－乙腈(73∶27)為流動相，流速1.0mL/min;檢測波長為270nm;進(jìn)樣量為20μL，理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
2.2對照品溶液的制備
取105℃干燥至恒重的淫羊藿苷對照品10mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取17mL，置50mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得(每1mL中含淫羊藿苷34μg)。
2.3供試品溶液的制備
取重量差異項(xiàng)下的本品10片，除去包衣，研細(xì)，取1.84g(約4片重)，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)20min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
2.4檢測波長的確定
精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加流動相制成每1mL中約含10μg的溶液，搖勻，照紫外分光光度法，在190～500nm處掃描，溶液在230nm波長處有最大吸收，確定檢測波長為270nm。
2.5系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
取供試品(040710批)與淫羊藿陰性對照制劑各約10g，照暫定的供試品溶液制備方法，制備供試品溶液與陰性對照溶液。取淫羊藿苷對照品溶液(34μg/mL)、供試品溶液與陰性對照溶液各20μL，測定。對照品色譜中，主峰理論板數(shù)為5507.09，供試品溶液色譜中，主峰與對照品溶液色譜峰保留時(shí)間對應(yīng)一致，淫羊藿苷峰理論板數(shù)為5645.81，與其他組分分離度為2.21。陰性對照液色譜中，未出現(xiàn)對應(yīng)峰，表明其他成分不干擾淫羊藿苷的測定。
2.6線性關(guān)系考察
精密量取對照品溶液(0.1mg/mL)14.0，15.5，17.0，18.5，20.0mL分別置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，各精密吸取20μL，分別注入液相色譜儀中，測定色譜峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，淫羊藿苷對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=28.774X－142.73，相關(guān)系數(shù)r=0.9994。結(jié)果表明，在28.0～40.0μg/mL濃度范圍內(nèi)，淫羊藿苷濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2.7精密度試驗(yàn)
照含量測定項(xiàng)下，制備供試品溶液，精密量取20μL，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，平均值為88.38，RSD為1.50%。本法的精密度良好。
2.8重現(xiàn)性試驗(yàn)
照含量測定項(xiàng)下，分別制備6份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，平均值為887.93，RSD為1.28%。表明本法的重現(xiàn)性良好。
2.9穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取供試品(040710批)溶液20μL，在上述色譜條件下，按0、2、4、6、8h時(shí)間間隔測定，平均值為879.56，RSD為1.49%。結(jié)果表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。
2.10回收率試驗(yàn)考察
取105℃干燥至恒重的淫羊藿苷對照品10mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取17mL，置50mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得(每1mL中含淫羊藿苷34μg)。作為對照品溶液。取重量差異項(xiàng)下的本品50片，除去包衣，研細(xì)，取1.84g(約4片重)，精密稱定，置100mL具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)20min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。作為供試品溶液。精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，測定，測得供試品中淫羊藿苷的含量為939.87μg/g。取105℃干燥至恒重的淫羊藿苷對照品25mg，精密稱定，置250mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取170mL，置500mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得(每1mL中含淫羊藿苷34μg)。作為加樣用對照品溶液。取上述已經(jīng)測定含量的供試品藥粉，分別精密稱定約1.2g、2.0g、2.7g各3份，置100mL具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)20min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。作為加樣用溶液。精密量取上述各溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定含量，計(jì)算加樣回收率，平均回收率為100.13%，RSD為2.22%(n=9)。結(jié)果見表1。
2.11陰性溶液的制備
取缺淫羊藿苷的陰性樣品，按供試品制備方法制備成陰性供試液，在上述色譜條件下進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，對照品溶液和供試品溶液均有相應(yīng)的峰出現(xiàn)，在淫羊藿苷相應(yīng)的保留時(shí)間處陰性液無吸收峰，處方中的其它成分不影響淫羊藿苷的含量測定。
2.12樣品測定
為制定含量限度，制備供試品三批，并與市售顆粒劑(批號4030048)比較。按上述測定方法，測定其中淫羊藿苷的含量，結(jié)果見表2。根據(jù)上述測定結(jié)果，并參照中國藥典有關(guān)品種的含量規(guī)定，暫定本品每片含淫羊藿苷(C33H40O15)計(jì)，不得少于0.22mg。
3討論
(1)提取溶劑的考察:在制備供試品溶液時(shí)，分別采用甲醇超聲、乙醇超聲、水超聲、0.1mol/L氨水超聲、甲醇回流、乙醇回流的方法考察樣品提取方法，結(jié)果以乙醇超聲提取效果最佳。(2)選擇適宜的流動相是含量測定的關(guān)鍵所在，實(shí)驗(yàn)中曾選用甲醇、水、冰醋酸為流動相，改變不同比例均不能達(dá)到理想的保留時(shí)間和分離效果;，選用乙腈、水、冰醋酸為流動相，調(diào)整比例后可以使保留時(shí)間適宜，使分離度和理論塔板數(shù)均符合要求。