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前言
目前,分子生物學(xué)實驗技術(shù)已經(jīng)成為探討生命科學(xué)基本問題的最常見的手段,經(jīng)典的DNA提取、質(zhì)??寺『吞崛?、核酸電泳、膠回收、蛋白提取與WesternBlot等常規(guī)分子生物學(xué)實驗技術(shù)成為醫(yī)學(xué)和生物學(xué)本科生需要掌握的基本技能[1-5]。然而,傳統(tǒng)的教學(xué)傾向于孤立的講解和指導(dǎo)這些實驗方法,側(cè)重按照實驗步驟完成實驗本身,僅僅是培養(yǎng)了學(xué)生的動手能力,而忽略了這些技術(shù)究竟能解決什么問題,以及如何在實際科研中具體應(yīng)用這些方法。事實上,后者對學(xué)生分析問題、解決問題更為重要,應(yīng)該是培養(yǎng)的重點[6]。以基于問題學(xué)習(xí)(Prob-lem-BasedLearning,即PBL)的教學(xué)模式在國內(nèi)外已經(jīng)得到普遍認(rèn)同與廣泛應(yīng)用[7-10]。然而,在分子生物學(xué)實驗教學(xué)中該方法存在一定難度,限制了其推廣和應(yīng)用。因為,單獨一個技術(shù)往往解決不了一個真正的科學(xué)問題;此外,一個科學(xué)問題往往又涉及太多實驗方法,是本科實驗教學(xué)常規(guī)實驗技術(shù)難以全面覆蓋。另外,以問題導(dǎo)向,往往涉及多個實驗,在實驗材料準(zhǔn)備等方面也提出更高要求。從這個角度,選擇合適的科學(xué)問題,并加以科學(xué)引導(dǎo)成為PBL在分子生物學(xué)實驗教學(xué)中的難點問題[11]。本研究針對本科實驗教學(xué)中出現(xiàn)的上述問題,嘗試通過證明"突變β-catenin促進結(jié)腸癌細(xì)胞增殖",將DNA提取、質(zhì)??寺『吞崛?、核酸電泳、蛋白提取與WesternBlot等常規(guī)分子生物學(xué)實驗有機整合起來,探討這種"PBL教學(xué)法"在分子生物學(xué)實驗教學(xué)中的應(yīng)用和具體效果。
1醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實驗課PBL教學(xué)科學(xué)問題的設(shè)置
針對教學(xué)大綱中涉及的DNA提取、質(zhì)粒克隆和提取、核酸電泳、蛋白提取與WesternBlot等要求,啟發(fā)并引導(dǎo)同學(xué)證明"突變β-catenin促進結(jié)腸癌細(xì)胞增殖"這一科學(xué)問題。具體分為:
(1)證明部分結(jié)腸癌細(xì)胞中存在β-catenin基因突變;具體實驗技術(shù)包括細(xì)胞培養(yǎng)、DNA的提取、PCR、膠回收和測序;
(2)證明突變的β-catenin促進細(xì)胞增殖。具體實驗技術(shù)包括DNA提取、PCR、載體構(gòu)建、質(zhì)粒提取、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、WB和細(xì)胞增殖實驗。其中細(xì)胞培養(yǎng)、測序、載體構(gòu)建、細(xì)胞增殖實驗為示教或者觀看錄像;其余的實驗則為學(xué)生具體操作。
2以"突變β-catenin促進結(jié)腸癌細(xì)胞增殖"為例的PBL實驗教學(xué)實施及效果
我科室承擔(dān)臨床醫(yī)學(xué)本科生分子生物學(xué)實驗課的教學(xué)。以往實驗課的教學(xué)內(nèi)容包括DNA提取、質(zhì)??寺『吞崛?、核酸電泳、膠回收、蛋白提取與WesternBlot等,這些實驗技術(shù)相對孤立的講解和實施。學(xué)生雖然能夠掌握每個實驗技術(shù)本身,但是對這些實驗技術(shù)之間的聯(lián)系及利用它們解決科學(xué)問題缺乏深層的思考和理解。近年來,我科室嘗試以科學(xué)問題為導(dǎo)向,試圖將這些實驗技術(shù)整合到一起,在培養(yǎng)學(xué)生動手能力的同時,培養(yǎng)分析、解決科學(xué)問題的能力。在具體實施時,任課教師首先介紹結(jié)腸癌的發(fā)病率及β-catenin突變在結(jié)腸癌演變中發(fā)揮重要作用。然后,拋出問題:如何證明"突變β-catenin促進結(jié)腸癌細(xì)胞增殖"。在引導(dǎo)下,將問題歸結(jié)為如何證明結(jié)腸癌細(xì)胞中存在β-catenin基因突變以及如何證明突變的β-catenin促進細(xì)胞增殖。在此基礎(chǔ)上,將實驗設(shè)計為:
1)提取結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞基因組DNA(結(jié)腸癌細(xì)胞株HCT116含有β-catenin突變),并通過PCR擴增β-catenin突變區(qū)域;
2)電泳PCR產(chǎn)物并膠回收、測序并分析測序結(jié)果;
3)觀看載體構(gòu)建錄像,提取突變型β-catenin表達載體,酶切鑒定;
4)示教細(xì)胞培養(yǎng)和基因轉(zhuǎn)染;
5)提取蛋白,Westernblot實驗驗證轉(zhuǎn)染效率;
6)示教MTT檢測細(xì)胞增殖。每堂課開始時,回顧前一個實驗的內(nèi)容;結(jié)束時,提出下一個實驗及目的。通過隨堂觀察學(xué)生的積極性,分析實驗記錄完成的質(zhì)量以及期末考試檢測對實驗技術(shù)本身的理解和運用能力,評價PBL教學(xué)的效果。結(jié)果顯示,使用PBL教學(xué)后,學(xué)生的積極性大幅度提高,主要表現(xiàn)為學(xué)生預(yù)習(xí)和復(fù)習(xí)的比例增加,回答問題的準(zhǔn)確率提高,期末考試成績比以往也顯著提高。90%的學(xué)生對該PBL教學(xué)的非常認(rèn)可,滿意度很高,大部分學(xué)生都認(rèn)為PBL教學(xué)提高了學(xué)習(xí)效率,調(diào)動了學(xué)習(xí)主動性和針對性,對分子生物學(xué)實驗和理論都有了很好的認(rèn)識。
3PBL教學(xué)在分子生物學(xué)實驗教學(xué)中的優(yōu)勢和存在問題
"突變β-catenin導(dǎo)致Wnt信號異常、進而促進結(jié)腸癌細(xì)胞增殖"是一個常見的、廣為認(rèn)可的科學(xué)問題[18-21],以此為問題的PBL教學(xué),系統(tǒng)整合了教學(xué)大綱要求的常見分子生物學(xué)實驗方法,全面生動的進行分子生物學(xué)實驗教學(xué),使得孤立的實驗方法變得系統(tǒng),并貼近實際應(yīng)用,提高了學(xué)生的主動性、積極性,提高了學(xué)習(xí)效率,改善了教學(xué)效果。我們通過實際教學(xué),總結(jié)出以"突變β-catenin促進結(jié)腸癌細(xì)胞增殖"為問題,開展PBL教學(xué)的優(yōu)越性和存在的問題,討論如下:
3.1以"突變β-catenin促進結(jié)腸癌細(xì)胞增殖"為問題的PBL教學(xué)
增強學(xué)生對知識的整體把握和運用作為一門實驗科學(xué),運用分子生物學(xué)技術(shù)解決實際臨床和科研工作是根本目的?;?突變β-catenin促進結(jié)腸癌細(xì)胞增殖"的課程設(shè)計,從教學(xué)效果上,首先鞏固了理論知識,貼近了未來臨床和科研工作,增強了學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣。授課時,老師在講解理論背景的同時,不斷啟發(fā)學(xué)生自己提出問題、解決問題,最后由老師總結(jié)、點評。同時老師將指出這一機制實際的發(fā)現(xiàn)過程,通過這種啟發(fā)和比較的教學(xué)方法,培養(yǎng)學(xué)生整體思考和解決問題的能力,為今后臨床和科研工作打下良好的基礎(chǔ)。
3.2PBL教學(xué)需要選好科學(xué)問題
通過作者的實踐表明,選好合理的科學(xué)問題是整合大綱規(guī)定的實驗技術(shù)、調(diào)動學(xué)生學(xué)習(xí)積極性的關(guān)鍵。隨著分子生物學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展,有些科學(xué)問題可以通過更加先進的實驗技術(shù)加以闡釋,完全開放或復(fù)雜的科學(xué)問題,可能將學(xué)生引入復(fù)雜的實驗技術(shù),超越本課程的要求和大部分學(xué)生的學(xué)習(xí)能力,反而起不到預(yù)期的效果。另一方面,過于簡單的科學(xué)問題,無法調(diào)動學(xué)生的興趣,也不能整合多個實驗技術(shù),失去了整合和系統(tǒng)的優(yōu)勢。
3.3PBL教學(xué)需要要充足的準(zhǔn)備時間和配套的教學(xué)資源
由于PBL教學(xué)模式要求以學(xué)生為主體、強調(diào)自主學(xué)習(xí),學(xué)生必須根據(jù)教師提出的問題進行分析,查閱大量的資料,整理、組織所得到的結(jié)果。要取得預(yù)期的教學(xué)效果,學(xué)生需要充分調(diào)研結(jié)腸癌的發(fā)病率、發(fā)病機制、基因突變等理論知識,同時要提前預(yù)習(xí)和熟悉實驗步驟。只有在理論和操作都有一定程度的理解的基礎(chǔ)上,才能有時間和精力理解這些方法內(nèi)在的聯(lián)系,也才能在掌握實驗技術(shù)本身的基礎(chǔ)上實現(xiàn)活學(xué)活用。實驗教學(xué)中,PBL教學(xué)需要準(zhǔn)備的不僅是科學(xué)問題本身,還需要準(zhǔn)備解決科學(xué)問題本身所需的實驗試劑和設(shè)備。從這個角度,選題的時候就必須考慮實驗試劑的可行性。"突變β-catenin促進結(jié)腸癌細(xì)胞增殖"需要特殊的實驗材料為β-catenin突變的細(xì)胞株,HCT116就屬于這樣一個細(xì)胞株,在分子生物學(xué)實驗室屬于常見細(xì)胞株,且104-105個細(xì)胞就可以滿足一個小組的實驗需求,因此容易保證實驗材料的供給。針對這樣的科學(xué)問題,實驗材料準(zhǔn)備是可行的;但相比傳統(tǒng)的組織DNA提取,實驗試劑的準(zhǔn)備工作量增加很多。實際操作中,可以考慮采用臨床驗證過的組織標(biāo)本?;?突變β-catenin促進結(jié)腸癌細(xì)胞增殖"的PBL教學(xué)中需要一些實驗銜接不同實驗技術(shù)教學(xué)之間的空檔,如基因轉(zhuǎn)染、載體構(gòu)建等。這些內(nèi)容有學(xué)生獨立完成需要較高的實驗平臺和試劑保障,所以采用示教和視頻觀摩的方式,即保證了完整性,又降低了難度和保障需求。最后,PBL實驗教學(xué)前后步驟(實驗)之間緊密聯(lián)系,一個實驗的失敗會導(dǎo)致后續(xù)實驗的失敗或中斷。這就要求:第一,教員在實驗試劑準(zhǔn)備方面要充分,及時準(zhǔn)備好備用樣本,保證實驗繼續(xù);第二,實驗的每一個階段,要有嚴(yán)格的對照和質(zhì)量控制,保證及時發(fā)現(xiàn)問題,尋找針對性補救措施。
4PBL應(yīng)用于醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實驗課教學(xué)的展望
應(yīng)用PBL進行醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)教學(xué),能夠有效將需要掌握的分子生物學(xué)問題有機的整合起來,解決傳統(tǒng)教學(xué)的孤立地講授各個實驗方法的弊端,提高教學(xué)效率和教學(xué)質(zhì)量,促進學(xué)生學(xué)習(xí)的主動性,增強了學(xué)生靈活運用知識的能力。但PBL用于實驗教學(xué)同樣面臨一些問題。例如,如何選擇合適的科學(xué)問題,使得盡量涵蓋所要教授的方法的同時,又不引入太多其它實驗方法;如何準(zhǔn)備相應(yīng)的實驗器材和試劑、特別是如何解決學(xué)生前一個實驗失敗導(dǎo)致的后續(xù)實驗無法繼續(xù)的問題。如何合理設(shè)計科學(xué)問題、充分準(zhǔn)備實驗設(shè)備和試劑、綜合使用示教和操作,在保證教學(xué)進度和內(nèi)容的基礎(chǔ)上提升教學(xué)質(zhì)量將是PBL教學(xué)發(fā)展的方向和主要解決的問題。
作者:楊國棟 韋夢影 盧曉昭 晉亮 王姍 單位:第四軍醫(yī)大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室