茶葉中吡蟲(chóng)啉殘留量的測(cè)定檢驗(yàn)方法

前言：想要寫(xiě)出一篇引人入勝的文章？我們特意為您整理了茶葉中吡蟲(chóng)啉殘留量的測(cè)定檢驗(yàn)方法范文，希望能給你帶來(lái)靈感和參考，敬請(qǐng)閱讀。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器、試劑與材料

Waters　ACQUITY　UPLCTM–TQD　MS／MS系統(tǒng)（美國(guó)waters）；高速勻質(zhì)機(jī)（德國(guó)IKA）；氮吹儀（美國(guó)Organomation）；離心機(jī)（日本日立）；漩渦混合器（德國(guó)IKA）；電子天平（FA1104，上海天平儀器廠）等。阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品；吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)品（95％）；乙腈（色譜純）；甲醇（色譜純）；乙腈（分析純）；固相萃取小柱：氨基炭黑柱（500mg／6mL）；水為二次蒸餾水。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱(chēng)量50．0mg阿維菌素和吡蟲(chóng)啉原藥于100mL棕色容量瓶中，用甲醇（色譜純）溶解并定容，配制成500mg／L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線

取阿維菌素和吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別用甲醇稀釋配制成5ng／mL、10ng／mL、50ng／mL、100ng／mL、500ng／mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，經(jīng)液相色譜測(cè)定后建立兩種目標(biāo)物濃度與峰面積的回歸方程。

1.4色譜質(zhì)譜條件

色譜柱：UPLC　ACQUITY　BEH，50×2．1mm，1．7μm；采用乙腈和0．005mol／L乙酸銨溶液梯度洗脫，洗脫程0～1min，20％A；1～4min，90％A；4～5min，100％A；5～7min，20％A。流速：0．3mL／min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL離子源：ESI，正離子模式；毛細(xì)管電壓：4．0kV；離子源溫度：110℃；脫溶劑氣溫度350℃；脫溶劑氣流量：800L／hr；錐孔反吹氣流量50L／hr；錐孔電壓：40v；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；離子對(duì)：吡蟲(chóng)啉，256／175．1（定量離子對(duì)），256／209；阿維菌素，890．5／305．2（定量離子對(duì)），890．5／567．3。

2分析步驟

2.1提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取2．5g（精確至0．01g）均勻試樣，用5mL水將試樣潤(rùn)濕，放置5min，加入5g無(wú)水硫酸鈉和15mL乙腈，渦動(dòng)3min，超聲5min，5000r／min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至濃縮瓶中。用10mL乙腈再提取一次，合并提取液。將提取液于50℃水浴下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，在殘?jiān)屑尤?．0mL甲醇＋二氯甲烷溶液，備用。

2.2凈化

將炭黑氨基柱用4．0mL甲醇＋二氯甲烷溶液（5＋95）預(yù)條件化，加入上述待凈化溶液，用10mL具塞試管收集，用2．0mL甲醇＋二氯甲烷溶液（5＋95）洗濃縮瓶后淋洗小柱，重復(fù)一次。將收集溶液置于50℃水浴中用氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?．0mL乙腈溶解，在漩渦混合器上混勻，過(guò)0．2μm微孔水相濾膜后于高效液相色譜測(cè)定。

3結(jié)果與討論

3.1工作曲線

用流動(dòng)相將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成5ng／mL、10ng／mL、50ng／mL、100ng／mL、500ng／mL，以峰面積為縱坐標(biāo)，目標(biāo)化合物的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。阿維菌素和吡蟲(chóng)啉的相關(guān)系數(shù)分別為R＝0．9991和R＝0．9985，回歸方程分別為y＝2632x＋1033和y＝8150x＋229，在5ng／mL～500ng／mL范圍內(nèi)，阿維菌素和吡蟲(chóng)啉工作曲線線性良好，適合定量分析。

3.2液相色譜、質(zhì)譜測(cè)定條件的優(yōu)化

阿維菌素和吡蟲(chóng)啉的極性較弱，在反相色譜柱上的保留較強(qiáng)，因此選擇較高比例的乙腈作為強(qiáng)洗脫溶劑。母離子掃描顯示：阿維菌素和吡蟲(chóng)啉在正離子模式下，目標(biāo)物檢測(cè)離子以［M＋NH4］＋形式存在的量較多，在流動(dòng)相中加入5mmol／L乙酸銨可促進(jìn)母離子的形成。兩種化合物的保留時(shí)間、定量離子、定性離子、錐孔電壓及碰撞能量。

3.3凈化條件的選擇

由于茶葉中色素含量較高，所以選取了可以有效吸附色素的色譜柱。結(jié)果表明，炭黑氨基柱可以很好的吸附色素和其他雜質(zhì)，同時(shí)，選用合適的洗脫液完全可以將兩種化合物洗脫，從而獲得較高的添加回收率。普通的氨基柱也可獲得較高的添加回收率，但由于不能吸附提取液中的色素，從而增加了對(duì)分析柱的污染及對(duì)儀器響應(yīng)的干擾，而選用堿性氧化鋁柱和C18SPE柱時(shí)不論選擇哪種淋洗劑，回收率均小于60％。所以最終選用炭黑氨基柱。淋洗液選用甲醇和二氯甲烷，對(duì)二者比例進(jìn)行了優(yōu)化，當(dāng)甲醇和二氯甲烷的比例在1∶99到5∶95之間，回收率均能滿足要求，當(dāng)甲醇和二氯甲烷的比例為5∶95時(shí)，回收率達(dá)到最大值。

3.4檢出限

聯(lián)合國(guó)糧食與農(nóng)業(yè)組織（FAO）與世界衛(wèi)生組織（WHO）均未制定最高允許殘留限量，加拿大和澳大利亞規(guī)定油菜籽中最高殘留限量為0．05mg／kg。聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織（FAO）所屬的食品中農(nóng)藥殘留立法委員會(huì)（CCRPF）規(guī)定了阿維菌素的每日允許攝入量0．1μg／kg•bw，阿維菌素的最高殘留限量（MRL）為5μg／kg，美國(guó)農(nóng)業(yè)部下屬的食品安全檢驗(yàn)局（FSIS）規(guī)定的MRL值為20μg／kg，歐盟規(guī)定MRL值為0．02mg／kg。加拿大衛(wèi)生部EMRL2012－45號(hào)通報(bào)，有害生物管理局修訂了吡蟲(chóng)啉的最大殘留限量。將吡蟲(chóng)啉在蛋、豬、馬、牛、綿羊、山羊、家禽的脂肪、肉以及肉副產(chǎn)品中的最大殘留限量修訂為0．02×10－6，將吡蟲(chóng)啉在干黃豆和奶類(lèi)中的最大殘留限量分別修訂。

3.5方法的準(zhǔn)確度與精確度

用上述試驗(yàn)方法，在樣品中添加不同水平的阿維菌素和吡蟲(chóng)啉混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，分別進(jìn)行了5μg／kg、20μg／kg和100μg／kg三個(gè)添加水平的兩種目標(biāo)化合物的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，平均回收率范圍為81．4％～95．8％，RSD分別為2．0％～8．5％。

3.6應(yīng)用

該方法已應(yīng)用于茶葉中阿維菌素類(lèi)藥物殘留的檢測(cè)。在對(duì)購(gòu)自湛江市場(chǎng)的5份綠茶、5份紅茶、5份普洱茶的檢測(cè)中，只有其中一份綠茶檢測(cè)出10．4μg／kg的吡蟲(chóng)啉。

4結(jié)論

本文建立了茶葉中阿維菌素和吡蟲(chóng)啉的超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜方法。通過(guò)對(duì)提取與凈化方式進(jìn)行探討與優(yōu)化，在一定程度上減少了茶葉基體對(duì)檢測(cè)的干擾。采用電噴霧電離源，在含有乙酸銨緩沖液的流動(dòng)相條件下，以選擇信號(hào)強(qiáng)且穩(wěn)定的［M＋NH4＋］加合離子峰作為母離子，以基質(zhì)校正曲線進(jìn)行定量。方法穩(wěn)定、可靠、靈敏，能夠滿足國(guó)內(nèi)外法規(guī)對(duì)茶葉中阿維菌素和吡蟲(chóng)啉殘留的限量要求，可用于茶葉中阿維菌素和吡蟲(chóng)啉兩種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)與確證。

作者：王立一 楊春亮 王曉芳 單位：中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所